Per l’analisi dati è stato realizzato un software che, partendo dalle immagini acquisite nei diversi intervalli di lunghezza d’onda, consente di ottenere mappe di fluidità con risoluzione al singolo pixel. Il primo passaggio utilizza il software open source Ilastik per applicare una classificazione dei pixel supervisionata, che consente di rimuovere la fluorescenza di fondo, ottenendo così una mappa delle sole membrane eritrocitarie. A questo punto, utilizzando ImageJ, le maschere vengono applicate all’immagine multicanale acquisita, per generare sequenze di immagini alle lunghezze d’onda di interesse per il calcolo dell’indice GP. L’interfaccia del software per la costruzione delle mappe di fluidità a risoluzione di singolo pixel, realizzato in LabView, è mostrata nella figura di seguito.
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Inoltre, il programma fornisce come output il valore medio di GP associato ad ogni immagine. Questi dati, integrati nel database, sono stati, quindi, utilizzati per il clustering gerarchico, utilizzando il software Orange, e per l’analisi logistica, effettuata utilizzando le librerie statsmodels e scikit-learn del linguaggio di programmazione Python.
Di seguito puoi scaricare il software dal nostro archivio Google Drive.